贴敷类医疗器械中17种化学药物识别及含量测定补充检验方法

近日卓械咨询了解到国际局根据《医疗器械监督管理条例》第七十六条规定，发布了贴敷类医疗器械中17种化学药物识别及含量测定补充检验方法，适用于以物理升温、物理退热、穴位压力刺激或者磁场作用等原理的贴敷类医疗器械。品名举例：远红外治疗贴、医用冷敷贴、医用退热贴、冷敷凝胶、磁疗贴、穴位压力刺激贴等。

1.不适用于以铁粉氧化升温致热为工作原理的热疗贴、热灸贴等产品。

2. 规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法。

3 .通则

3.1本方法中的室温，如无特殊规定，应为10 ℃～30 ℃。

3.2本方法中试验用水应符合GB/T 6682的要求。

3.3本方法中所用容器如无特殊规定，应为硅硼酸盐玻璃容器。

3.4本方法中所涉及的量取，应使用符合相应国家标准规定的准确度要求的移液管量取。

4. 测定方法

4.1 概述

高效液相色谱仪的二极管阵列检测器（DAD）能够进行全波长扫描，灵敏度较高，且应用普遍、易于操作。高分辨的一级（MS）、二级质谱（MS2）数据能够给出更加准确可靠的结构信息。本方法采用高效液相色谱法（HPLC）进行初筛，高分辨液质联用法（HRMS/MS）或等效的液质联用法进行验证，验证后的阳性样品采用高效液相色谱法（HPLC）进行含量测定。

4.2 供试液的制备

取样品1贴，撕开不粘层，展开，贴在定量滤纸上，用剪刀裁去多余滤纸，然后将样品剪成0.5 cm×0.5 cm的小片，置于150 mL烧瓶中，加入甲醇适量将样品完全浸没，70 ℃回流两次，每次2 h。将浸提液转移至100 mL容量瓶中，用少量甲醇洗涤样品三次，合并洗涤液至容量瓶中，用甲醇定容至刻度，摇匀。取上述溶液经0.2 μm微孔滤膜过滤后作为供试液，必要时可进行适当倍数的稀释。

4.3高效液相色谱法

4.3.1 仪器与试剂

4.3.1.1 仪器

高效液相色谱仪，配有二极管阵列检测器。

4.3.1.2 试剂

a）甲醇：色谱纯，CAS# 67-56-1；

b）乙腈：色谱纯，CAS# 75-05-8；

c）磷酸：分析纯，CAS# 7664-38-2；

d）17种药物信息见表1。

表1 17种药物信息

4.3.2药物对照品储备溶液的配制

分别取4.3.1.2中17种药物对照品各约10 mg，精密称定，置10 mL棕色容量瓶中，加入甲醇溶解后定容，摇匀，配制成浓度为1 mg/mL的药物对照品储备溶液。

4.3.3高效液相色谱条件（推荐）

4.3.3.1色谱柱：XBridge BEH Shield RP18 2.5 μm  4.6×150 mm，或其他等效色谱柱。

4.3.3.2柱温：35 ℃，样品室温度：10 ℃；

4.3.3.3流速：1 mL/min；

4.3.3.4检测波长：220 nm，扫描范围：190 nm～400 nm；

4.3.3.5进样量：10 μL。

4.3.3.6流动相：A（pH 3.0的磷酸水溶液）  B（甲醇：乙腈 1：1），梯度条件见表2。

表2  HPLC法流动相梯度条件

4.3.4系统适应性试验

4.3.4.1 分离度

取4.3.2中17种药物对照品储备溶液各0.1 mL于10 mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，制成浓度为10 mg/L的混合对照溶液，取10 μL注入液相色谱仪，记录色谱图，17种对照品的色谱峰与相邻色谱峰之间的分离度应大于1.5。

4.3.4.2 灵敏度

取4.3.2中17种药物对照品储备溶液适量，分别用甲醇稀释至表3中“检出限（LOD）”的浓度，取10 μL注入液相色谱仪，记录色谱图，17种对照品的色谱峰信噪比（S/N）均应大于3:1。

表3   17种药物灵敏度要求

4.4高分辨液质联用法

4.4.1 仪器与试剂

4.4.1.1 仪器

高分辨液质联用仪

4.4.1.2 试剂

a）甲醇：质谱纯，CAS# 67-56-1；

b）乙酸铵：质谱纯，CAS# 631-61-8；

c）17种药物对照品同4.3.1.2 d）。

4.4.2对照品溶液配制

同4.3.4.1中浓度为10 mg/L的混合对照溶液配制。

4.4.3色谱条件（示例）

4.4.3.1色谱柱：Hypersil Gold 100×2.1 mm 1.9 μm，或其他等效色谱柱。

4.4.3.2 柱温：40 ℃，样品室温度：10 ℃；

4.4.3.3 流速：0.2 mL/min；

4.4.3.4 检测波长：220 nm；

4.4.3.5进样量：2 μL。

4.4.3.6 流动相：A（10 mmol/L乙酸铵的水溶液）  B（甲醇），梯度条件见表4。

表4  HPLC-HRMS/MS法流动相梯度条件

4.4.4质谱条件（示例）

4.4.4.1 仪器型号：Themo Q-Exactive Focus型高分辨液质联用仪。

4.4.4.2 离子源：ESI  扫描模式：正负切换；

4.4.4.3 鞘气：30 arb  辅助气：8 arb 吹扫气：0 arb；

4.4.4.4 电喷雾电压：3.0 kV；

4.4.4.5 毛细管温度：320 ℃；

4.4.4.6 传输透镜电压：55.0 %；

4.4.4.7 辅助气加热温度：300 ℃；

4.4.4.8 17种药物测定参数见表5。

表5   17种药物检测模式、二级能量及碎片离子

注：*为基峰

4.5药物识别及其含量测定

取4.2制备的供试液及4.3.4.1制备的10 mg/L的混合对照溶液，按照4.3.3的方法进样分析。将二者结果进行对比，以保留时间（tR）及190 nm~400 nm的紫外光谱图一致性作为初筛依据。

取可能含有药物的供试液及相应药物对照品溶液，按照4.4.3、4.4.4的方法进样分析。将供试液与对照品溶液的母离子及碎片离子信息进行对比，二者一致则确认该样品中含有相应的药物成分。

取4.3.2中阳性样品中所含药物的对照品储备溶液，配制成系列浓度的标准溶液，按照4.3.3的方法进样分析。绘制浓度-峰面积标准曲线，根据峰面积计算样品中药物的量。图1给出了17种药物的典型色谱图。

4.6其他药物识别方法

本方法中给出了17种药物的识别和含量测定方法，如关注其他可能添加的药物，也可采用经方法学验证的方法进行分析。

5 结果判定

供试液中不得检出上述17种药物成分（检出限见表3）。